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细胞成像

FCCIC维护三个主要仪器:蔡司LSM880激光扫描共焦显微镜,徕卡TCS SP8潜水多光子显微镜,蔡司大视场显微镜和提供辅助使用服务(收费)所有设备以及专用的伊万里瓷器图像处理工作站。培训和无助的使用(税率)可供LSM880共焦显微镜和伊万里瓷器工作站。共焦时间流逝成像可为独立用户下班后和周末折扣每小时工资率。附加服务包括:vibratome切片,免疫荧光染色(标准和厚的组织),宽视野成像(辅助、独立和训练)和伊万里瓷器图像处理。服务费用不同,可以通过iLab随着我们的服务请求的形式。请联系Collene队长(cjeter@mdanderson.org)在初始调度服务。

服务和应用程序

共焦成像

蔡司LSM880与Airyscan超分辨率图像两个复合因素的减数分裂染色体染色。(图片由科尔实验室)

蔡司LSM880激光扫描共焦显微镜允许高分辨率,多光谱成像的细胞和组织部分。应用程序包括:多光谱成像,z-stacking和三维共焦成像、超分辨率成像,激光microirradiations live-cell成像,蛋白质相互作用(例如,烦恼,解放军,BiFC)和细胞跟踪分析。96孔板适配器提供高吞吐量在共焦或广角成像系统和两个系统配备孵化和有限公司₂控制活细胞成像。细胞成像服务包括定制培养细胞免疫荧光染色,低温和FFPE样本。额外的细胞成像光学显微镜服务包括广角成像在蔡司Axio-Observer荧光显微镜和数字化图像处理使用Bitplane伊万里瓷器的软件使3 d和4 d图像重建和先进的定性和定量图像分析。更多详细信息,请参阅仪表。

多光子成像

3维重建的徕卡TCS SP8潜水z-stack图像组织沾anti-CD31(绿色)和phalloidin(红色)染色血管和肌肉组织,分别(bar = 100µm)(图片由削弱实验室)。

徕卡TCS SP8潜水多光子显微镜(MP)使用红外激发光,提供深入的渗透到厚组织和可以用来检查厚部分,完整的器官,和体内过程与成像深度、最大最小光散射,z-resolution增加和减少光毒性。Z-stacks结合瓷砖扫描可以体积渲染生成3 d重构和地貌形态示量分析。

为了支持多光子成像,FCCIC还维护了徕卡VT1200S自动化vibratome削减厚组织和莱卡M165FC荧光立体显微镜显微解剖和组织准备。FCCIC提供vibratome切片和组织制备服务以及定制厚组织免疫荧光染色服务。更多详细信息,请参阅仪表

其他服务和显微镜的应用程序

多光谱荧光成像技术
免疫荧光染色
伊万里瓷器(Bitplane)图像处理
蛋白质分布& Colocalization研究
三维重建与组织的形态学分析
UVA激光Microirradiation DNA损伤修复
烦恼和收紧
活细胞成像
Vibratome切片
咨询和培训

培训

细胞成像建议用户首次接触Collene队长(cjeter@mdanderson.org)之前安排协商敲定任何实验计划。这个协商将允许用户和核心员工讨论实验设计,实验室的预期服务和项目的范围的服务成本。

核心建议用户至少安排预约服务日期前1周。这是特别关键的用户要求和/或员工的培训援助。

仪器培训是强制性的任何用户的细胞成像核心强使共焦成像。培训是由Collene队长(cjeter@mdanderson.org),将包括在多天的时间。在完成培训,完成将获得的证书。

核心员工可以引导用户优化样品制备,选择仪器和成像参数,为研究人员开发新的应用程序。核心也帮助用户理解并应用图像处理软件(例如Bitplane伊万里瓷器的软件),或者他们可以为一个特定的项目进行分析,在时间允许的情况下,一个额外的费用。

请注意,每一个用户负责归档他或她自己的数据。核心人员能够帮助用户在学习这种做法。

仪表

蔡司LSM880与Airyscan

蔡司LSM880共焦显微镜有五个激光有效激发的荧光团从蓝色到红色,波长355纳米的激光对DNA损伤修复研究,附近的一个Airyscan探测器允许超分辨率成像,烦恼/收紧模块和延时成像的孵化室。Airyscan提供改善信噪比(信噪比)相对传统GaAsP探测器和1.7 x高分辨率空间维度(横向140 nm和400 nm轴向)。快Airyscan成像形态提供了一个平衡灵敏度高,分辨率和速度最快的和温和的成像的活细胞和组织。结合我们的UVA microirradiation激光调查人员可以通过成像的动态量化DNA损伤和修复DNA损伤位点的分子之间的相互作用。利用(例如,收紧和光敏化/转换)模块允许动态分子流程分析和烦恼模块允许审讯候选蛋白质-蛋白质之间的关系。这个范围结合Bitplane伊万里瓷器图像处理软件将允许z-stacked图像的三维重建,定量分析和细胞跟踪分析。

蔡司LSM880共焦图像

超分辨率图像的小鼠成纤维细胞细胞染色LAMP1(绿色)和LC8(红色)动力蛋白溶酶体和可视化复杂,分别(布拉顿实验室的礼貌)。

缝合5 x5的瓷砖马赛克子集扫描显示DNA损伤病灶——γH2AX(绿色)和53 bp1(红色)在核(蓝色)。

在开发过程中多光谱分析胸腺细胞上皮细胞规范。两个转录因子(红色和绿色)指定细胞命运(由里奇实验室)。

瓷砖马赛克4个字段的视图显示再生前列腺细胞和基底细胞(红色)和腔的细胞(绿色)的特点。

缝马赛克25字段的视图显示前列腺的异质性。基底细胞(红色),腔的细胞(绿色),核(蓝色)。

泛函分析在结肠隐窝干细胞标记。干细胞(绿色),分化Paneth细胞(红色),细胞核(蓝色)。

分析微管蛋白的翻译后修饰在生殖细胞的发展。乙酰化微管蛋白(红色),核(蓝色)。

徕卡TCS SP8潜水多光子显微镜

徕卡TCS SP8潜水可以用来检查厚部分,完整的器官,和体内过程与成像深度、最大最小光散射,z-resolution增加和减少光毒性。SpectraPhysics Insight X3和双激光行包括一个可调线,可以调到680 nm和1300 nm和1040 nm之间固定线,加上变量dichroic-based光谱检测提供了同步光谱分离,多渠道获取任何荧光团。加上4个独立可调高量化宽松non-descanned混合(海德拉巴)探测器,该系统提供了自由和最大效率荧光光谱检测。一个额外的探测器在透射光路径对第二和第三次谐波是最优的。徕卡潜水梁路由与不同的光学扩束镜允许动态调整直径和束集中优化激发光束colocalization的可见光和红外波段以及优化激励位置最大深度或最大分辨率取决于实验的需要。徕卡SP8潜水议员的扫描光学系统进行了优化传输和彩色校正从400纳米到1300纳米,包括16 x混合浸(例如清晰)很长工作距离的目标(NA 0.8、布线图8.1毫米),25 x水浸蘸客观(NA 0.95、布线图2.6毫米)和40 x水盖玻片纠正目标(NA 1.1、布线图0.65毫米)。支持多光子成像,核心还维护了徕卡VT1200S自动化vibratome削减厚组织和莱卡M165FC荧光立体显微镜显微解剖和组织准备